Em Gulf, Mobile & Ohio vinte e três linhas ferroviárias diferentes existem no jogo, cada uma representada por duas ações: uma ação para o jogador que funda esta ferrovia e uma ação comum que pode ser leiloada mais tarde no jogo. Oito ferrovias são designadas como linhas de partida e, inicialmente, apenas as ações dessas oito linhas estão disponíveis para os jogadores. Linhas ferroviárias serão representadas no tabuleiro de jogo com cubos de madeira que vêm em seis cores, com o número de cubos variando de 6 a 32.